产品货号:
BTN90208
中文名称:
大肠杆菌SURE化学感受态细胞
英文名称:
E.coli SURE Chemical Competent Cell
产品规格:
0.1mL*10
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。
菌株基因型:
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
相关搜索:大肠杆菌SURE化学感受态细胞,E.coli SURE Chemical Competent Cell
菌株基因型:
基因型 | 表现型 |
endA1 | 核酸内切酶I缺失 |
gyr A96 | 具有萘啶酮酸抗性 |
lac | 不能利用乳糖 |
rec B & rec J | DNA重组修复功能缺失 |
relA1 | 允许在无蛋白质合成时有RNA合成 |
sbcC | 允许基本重组 |
supE44 | 抑制琥珀突变,为某些噬菌体必需 |
thi-1 | 需要硫氨才能生长 |
umuC::Tn5 | 卡那霉素抗性 |
uvr C | 不能切除变异碱基 |
mcrA△(mcr CB-hsdSMR-mrr)171 | DNA甲基化系统缺失 |
F’[ lacIlac Z△M15 Tn10 proAB+] | 提供α-互补所需的ω片断,具有四环素抗性 |
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
相关搜索:大肠杆菌SURE化学感受态细胞,E.coli SURE Chemical Competent Cell